Technika PCR precyzja i szybkość w wykrywaniu Listeria monocytogenes

Bezpieczna mikrobiologicznie żywność to wyzwanie nie tylko dla przedsiębiorcy, który ją produkuje i dystrybuuje, ale także dla laboratoriów wykrywających patogeny, w wyborze właściwej metody diagnostycznej.

Jednym z najbardziej zjadliwych patogenów przenoszonych przez żywność jest Listeria monocytogenes, Listerioza stanowi najwyższy odsetek hospitalizowanych przypadków (97%), z najwyższym współczynnikiem śmiertelności (20 - 30%).

Dla kogo technika PCR?

Charakterystyczną cechą większości produktów spożywczych jest ich stosunkowo niska trwałość oraz podatność na działanie mikroorganizmów. Ponadto konsument coraz częściej sięga po produkty minimalnie przetworzone, które cechuje krótki termin przydatności do spożycia. W tej sytuacji czas ma ogromne znaczenie i tu z pomocą przychodzą metody biologii molekularnej, m.in. technika PCR. Łańcuchowa reakcja polimerazy jest skutecznym narzędziem wykrywania L. monocytogenes.

Uzyskany wynik jest obiektywny, ponieważ test opiera się na znajomości stałej struktury DNA sekwencji określonych nukleotydów, niezależnej od stanu fizjologicznego mikroorganizmu.

Klasyczna analiza mikrobiologiczna (PN-EN ISO 11290-2) choć uznana za niezawodną i skuteczną, wymaga kilku dni (min. 4 dni – do uzyskania wyniku ujemnego), a czasem i kilkunastu do momentu uzyskania ostatecznego rezultatu.

W przypadku PCR całkowity czas oznaczenia to 30 godzin (dla wyniku ujemnego). Konieczne jest jednak potwierdzenie wyniku z etapu detekcji (w przypadku wyniku dodatniego).

Czym są VBNC?

Zdarza się, że fenotypowe cechy stanowiące kryterium identyfikacji nie ulegają ekspresji, co uniemożliwia prawidłową diagnozę. Innym problemem są tzw. formy VBNC „żywe, lecz nie dające się hodować”.

Konwencjonalne metody hodowlane pozwalają na oznaczenie zaledwie 1-10% składu populacji stanowiącej określony ekosystem. Komórki drobnoustrojów chorobotwórczych w fazie VBNC pozostają metabolicznie aktywne, stanowiąc tym samym poważny problem zdrowotny, zwłaszcza, że cechują się większą wirulencją.

Zastosowanie PCR pozwala precyzyjnie wykryć bakterie w stanie VBNC, jednocześnie podnosząc stan bezpieczeństwa żywności.

Czym jest PCR?

Reakcja ta służy do wielokrotnego powielenia specyficznego dla danego gatunku fragmentu DNA in vitro, jest katalizowana przez polimerazę. Enzym ten do rozpoczęcia reakcji potrzebuje matrycowego DNA oraz starterów reakcji.

Startery są dobrane tak, aby łączyły się z DNA jedynie ściśle określonego gatunku, zapewniając tym samym 100% specyficzność badania, czyli 100% pewność, że wykryty patogen, jest dokładnie tym, którego poszukujemy.

Ponadto technika PCR pozwala uniknąć błędów diagnostycznych, co zasadniczo zwiększa bezpieczeństwo potencjalnego konsumenta eliminując wyniki fałszywie ujemne, związane z obecnością inhibitorów reakcji PCR. Problem ten rozwiązano poprzez dodawanie do reakcji PCR wewnętrznej kontroli amplifikacji.

Techniką PCR jest wykrywane także DNA z martwych komórek bakteryjnych, które nie stanowią zagrożenia dla zdrowia publicznego. Jednak ten problem również rozwiązano, uwzględniając rozcieńczenie próbki związane z etapem jej przednamnażania (wzbogacenie hodowli w żywe komórki docelowego patogenu, przy jednoczesnym zmniejszeniu ilości komórek martwych). Zatem PCR zabezpiecza również producentów żywności, tym razem przed wynikami fałszywie dodatnimi, które potrafią naruszyć renomę przedsiębiorstwa i narazić je na ogromne koszty.

W Laboratorium Intertek Poland Sp. z o.o. metody PCR są już powszechnie stosowane w celu szybkiego wykrywania patogenów żywności.

Zapraszamy do kontaktu w celu uzyskania promocyjnej oferty.

Słowa kluczowe: PCR, Listeria monocytogenes, Laboratorium Badawcze Intertek