Zapisz się do newslettera
Najważniejsze informacje dla branży spożywczej!
Zapisz się na newsletter FoodFakty i bądź na bieżąco:
W lipcu tego roku Health Canada opublikowała w TheCompendium of Analytical Methods, Volume 1, Part 6 - procedurę dotyczącą wprowadzania oraz zarządzania metodami badań mikrobiologicznych żywności w formie szczegółowego opracowania. Poniżej przedstawiamy Państwu załącznik do powyższego dokumentu: Załącznik 6.1 Przykłady MPN Liczenia Próbek ze Środowisk Powierzchni
Cześć pierwsza przewodnika: Wymogi CETA dla eksporterów żywności - Wymazy w kierunku patogenów z obszaru produkcji (1)
Przedmiot
Przedmiotem protokołu jest policzenie komórek Listeria monocytogenes uzyskanych z powierzchni środowiska z wykorzystaniem gąbek lub wymazówek. Protokół jest wykonany na podstawie metody najbardziej prawdopodobnej liczby (most probable number-MPN) z wykorzystaniem różnych podłoży agarowych, co pozwoli na bezpośrednią obserwację Listeria monocytogenes z konkurującymi w tle mikroorganizmani takimi jak L. innocua.
Podsumowanie protokołu
Komórki uzyskane z badań powierzchni są dystrybuowane do dołków na płytce 96- dołkowej zawierające wzbogacone podłoże, Następuje inkubacja, małe porcje z każdego dołka są przenoszone na różne pożywki agarowe. Krople są umieszczone na powierzchni agaru z siatką kwadratów w powtórzeniach na płytkach 96-dołkowych. Po procesie inkubacji w kroplach zawierających L.monocytogenes były obecne wyraźne formy wzrostu, łatwe do policzenia. Gatunki niedocelowe takie jak L. innocua , mogą wyrastać na agarze w różnej formie i kolorze co ułatwia rozróżnienie. Następnie może być wykorzystane oprogramowanie do wyliczenia najbardziej prawdopodobnej liczby (most probable number-MPN) w celu oszacowania liczby L. monocytogenes uzyskanej z powierzchni. Protokół jest właściwy dla koncentracji komórek L. monocytogenes w zakresie od 1 do 440 CFU/gąbkę lub wacik i jest adekwatny do typowej oceny próbek koncentracji komórek z wysokiego poziomu.
Materiał i Metody
Komórki mogą być uzyskane zarówno z gąbek jak i wacików namoczonych w neutralizującym buforze. Następujący protokół wykonano na podstawie wykorzystania gąbek. Istnieje zamierzenie jako wytyczna, która może będzie musiała być modyfikowana w zależności od użytych zestawów do pobierania próbek i ich transportu. Przykład sugerowanej modyfikacji użycia wymazówek jest podany na końcu protokołu.
Posiew wgłębny na płytkach dołkowych
Transfer na podłoża Agarowe selektywne/Różnicujące
Wykorzystaj liczbę błękitnych plamek ( czystych i mieszanych) oraz całkowitą liczbę dołków zaszczepionych ( 96 lub mniej w przypadku gdy ilość materiału była niewystarczająca) w celu policzenia MPN L. monocytogenes uzyskanej z badanej powierzchni. Wzór do obliczenia MPN znajduje się tutaj:
http://www.fda.gov/Food/FoodScienceResearch/LaboratoryMethods/ucm109656.htm)
wzór ten w formie uproszczonej jest następujący:
MPN per test area= −ln (1−p/n)×n
p- liczna pozytywnych (niebieskich punktów)
n- liczba wgłębień w metodzie wgłębnego posiewu na płytki z wgłębieniami ( 96 lub mniej)
Modyfikacja w przypadku użycia wacików
Stosowane wymazówki są zazwyczaj w probówkach zawierających 1 mL neutralnego buforu do zmoczenia wacików. Po pobraniu wymazu protokół może być dostosowany i może być wzięta pod uwagę mniejsza wielkość wacika i ilość płynu.
Sugerowane modyfikacje obejmują:
Przeczytaj także
W lipcu tego roku Health Canada opublikowała w TheCompendium of Analytical Methods, Volume 1, Part 6 procedurę dotyczącą wprowadzanie oraz zarządzania metodami badań mikrobiologicznych żywności w formie szczegółowego...
W lipcu tego roku Health Canada opublikowała w TheCompendium of Analytical Methods, Volume 1, Part 6 procedurę dotyczącą wprowadzanie oraz zarządzania metodami badań mikrobiologicznych żywności w formie szczegółowego...
W lipcu tego roku Health Canada opublikowała w The Compendium of Analytical Methods, Volume 1, Part 6 procedurę dotyczącą wprowadzanie oraz zarządzania metodami badań mikrobiologicznych żywności w formie szczegółowego opracowania...